В рамках данной работы была исследована возможность адаптации различных штаммов метилотрофных бактерий, продуцентов аминокислот к росту на средах с максимальными концентрациями тяжёлой воды. Для этого были проверены два из имеющихся в коллекции “ГосНИИ Генетики” штаммов метилотрофных бактерий: штамм облигатных метилотрофных бактерий M. flagellatum, продуцент L-лейцина и штамм факультативных метилотрофных бактерий B. methylicum, продуцент L-фенилаланина.

Для проведения адаптации был выбран ступенчатый режим увеличения концентрации 2Н2О в ростовых средах, так как мы предположили, что постепенное привыкание организма к 2Н2О будет оказывать благоприятный эффект на адаптацию. Этапы адаптации метилотрофных бактерий к средам, содержащим максимальные концентрации 2Н2О показаны на рис. 1 и схеме. Однако вопреки нашим ожиданиям, штамм облигатных метилотрофных бактерий M. flagellatum обнаружил повышенную чувствительность к тяжёлой воде (ингибирование роста бактерий наблюдалось при концентрациях 2Н2О в среде 74,5 об.%) [3]. Дальнейшие эксперименты по адаптации с данным штаммом метилотрофных бактерий не проводились. В связи с этим в наших экспериментах по изучению уровней включения дейтерия в аминокислоты использовались препараты культуральной жидкости и биомасса M. flagellatum, полученная со среды, содержащей 74,5 об.% 2Н2О и 1 об.% С2Н3О2Н.

Раннее нами был описан метод адаптации штамма факультативных метилотрофных бактерий B. methylicum к росту при сохранении способности к биосинтезу фенилаланина на максимально дейтерированной среде [7]. В данной работе были исследованы образцы биомассы штамма B. Methylicum (рис.1), полученные в ходе многоступенчатой адаптации его к тяжёлой воде на средах с различным содержанием 2Н2О (от 0; 24,5; 49,0; 74,5; об% до 98 об% 2Н2О). Поскольку данный штамм метилотрофных бактерий удалось адаптировать к максимальным концентрациям 2Н2О в ростовой среде, исследование уровней включения дейтерия в аминокислоты суммарных белков биомассы представлялось наиболее интересным.

Факультативные метилотрофные Облигатные метилотрофные

бактерии B. methylicum-источники бактерии M. flagellatum,

2Н-аминокислот источники 2Н-и 13С-

аминокислот

Многоступенчатая адаптация бактерий к

2Н2О на средах, содержащих 0; 24,5; 49; 74,5; 98

об.% 2H2O

B. methylicum, адаптированный M. flagellatum,

к 98 об.% 2Н2О и 2 об.% С2Н3О2Н замедление роста на

среде, содержащей 74,5 об.% 2Н2О

Культивирование на средах, Культивирование на среде,

содержащих различные концентрации содержащей обычную воду

2Н2О и 1 об.% 13СН3ОН

Культуральная жидкость после биомасса биомасса Культуральная жидкость после отделения от клеток отделения от клеток

2Н-секретируемые аминокислоты 13С-секретируемые аминокислоты