Разработка путей биосинтетического получения аминокислот, меченных 2Н и 13С является актуальной задачей для современной биотехнологии. Стоимость полученных таким способом изотопно меченных соединений значительно ниже, чем химически синтезированных, что представляет интерес для поиска новых штаммов - продуцентов аминокислот, способных к росту и биосинтезу на изотопно-меченных средах.

Удобными и дешёвыми источниками изотопно-меченных аминокислот могут быть метилотрофные бактерии, биотехнологический потенциал которых в настоящее время общепризнан [1,2]. Субстратом для роста метилотрофов при получении меченных аминокислот является метанол (или его меченные аналоги С2Н3О2Н/13СН3ОН), и другие низкомолекулярные соединения, например, тяжёлая вода (2Н2О) [3]. Однако, высокие концентрации 2Н2О в ростовой среде могут вызвать ингибирование роста и развития метилотрофов [3]. Несмотря на негативный биостатический эффект, оказываемый тяжёлой водой на клетки, некоторые бактерии устойчивы к высоким концентрациям тяжёлой воды в среде [4], в то время как растительные клетки могут нормально развиваются при концентрациях не более 50-75 % 2Н2О, а клетки животных не более 35 % 2Н2О [5]. В отличие от тяжёлой воды, при использовании 13СН3ОН в качестве источника метки нет необходимости проводить предварительную адаптацию культуры к изотопному субстрату, так как показано, что изотопный эффект 13СН3ОН незначителен [6]. Поэтому использование для получения 13С -аминокислот облигатных метилотрофных бактерий, которые способны ассимилировать только метанол в качестве единственного источника углерода и энергии является очень перспективным.

В плане раннее начатых исследований с метилотрофами по получению аминокислот, меченных стабильными изотопами, практический интерес представляет использование метилотрофных бактерий, особенно продуцентов аминокислот для получения целевых соединений за счет биоконверсии низкомолекулярных меченных субстратов [7-10]. Традиционным подходом при получении аминокислот является культивирование штаммов - продуцентов на средах, содержащих изотопно-меченные субстраты и 2Н2О с последующим выделением меченных аминокислот как из культуральной жидкости после ферментации штаммов-продуцентов, так и из гидролизатов общего белка биомассы.

Целью данной работы было изучение принципиальной возможности получения 2Н-и 13С-аминокислот за счёт использования штаммов метилотрофных бактерий Brevibacterium methylicum и Methylobacillus flagellatum .

• Условия эксперимента.
• Получение штаммов - продуцентов аминокислот, адаптированных к максимальным концентрациям 2Н2О в среде.
• Изучение ростовых характеристик M. flagellatum на средах, содержащих СН3ОН/С2Н3О2Н/13СН3ОН и 2Н2О.
• Изучение ростовых и биосинтетических характеристик B. methylicum на средах, содержащих СН3ОН/С2Н3О2Н и 2Н2О.
• Изучение уровней включения изотопов 2Н- и 13С в секретируемые аминокислоты метилотрофных бактерий.
• Изучение уровней включения изотопов 2Н- и 13С в аминокислоты суммарных белков метилотрофных бактерий.
• Выделение изотопно-меченных аминокислот из культуральной жидкости и гидролизатов биомассы метилотрофных бактерий.